【產品名稱】

通用名稱 ：骨切片

英文品名: bone slices

【預期用途】

本產品僅供科研使用 。

用於傳統染色法和培養基ELISA（CrossLaps）骨破壞重吸收的體外精確檢測

【產品簡介】

骨是一種很有活力的組織 ，在人的一生中都在不斷地重建 。現已證實 ，在骨中存在一些特殊物質 ，能夠影響到破骨細胞的活性 。因此尊龍凱時使用高質骨而不是牙質應用於研究 。現在將向尊龍凱時的客戶提供此類服務 。

每批骨切片通過重吸收檢測法來測試其質量 。在該檢測中 ，由骨切片上產生凹點證明破骨能力 。隨後用培養基酶免吸附試劑盒Crosslaps檢測上清液 。隻有當兩項測試都呈陽性時 ，該骨切片才能用於進一步的重吸收檢測 。

破骨細胞產生凹點的活性通過人破骨重吸收方法檢測 。對破骨重吸收的定量分析可以采用傳統的對凹點染色方法，亦可使用培養基酶免吸附檢測法Crosslaps 。

由於破骨細胞實驗往往需要較大量的蛋白質 ，而從牛骨切片中提取的蛋白質用於96孔板 。

將人破骨細胞分散覆蓋於牛骨皮質片上 ，然後加入不同濃度的抗重吸收劑（A: 90 μM, B: 30 μM, C: 10 μM, D: 0 μM） 。第6天取等量細胞培養上清液用於檢測膠原c端交聯肽（ctx）的量（培養基ELISA-CrossLaps）,從骨片上轉移破骨細胞並且用阻凝蛋白蘇木精染色 ，形成可見的凹點（圖1） 。

尊龍凱時正使用這種6孔板大骨片（GBS）來提取破骨細胞蛋白 ，這些破骨細胞在骨上而非塑料上培養 ，對蛋白質的表達是有影響的（數據未列出） 。要進行破骨細胞的基因描述實驗時 ，尊龍凱時推薦使用這些底物提取RNA 。從骨切片分離RNA的方案和人破骨細胞的培養方案可根據要求製定 。

【來源】

骨切片由牛股骨的皮質部分製成 ，完全適合96孔板 ，直徑6mm ，大概200μm厚 。

【儲存】

骨切片保存於4°C下70%乙醇中 。為了保持骨切片的質量 ，應縮短使用周期和避免室溫下放置 。

【處理】

尊龍凱時推薦在轉移至96孔板之前 ，先將骨切片置於含培養基的10%血清中清洗三次 。

【培養】

重吸收實驗一般持續72小時 。然而在加入試劑到破骨細胞培養液中16或24小時後 ，就可觀察到細微的變化了 ，甚至8小時後即可用相應方法觀察到 。

【特征】

與凹點染色和劃線不同 ，培養基酶免吸附法Crosslaps不要求破骨細胞培養的終止 。因此 ，可以從相同的股切片中獲得幾個樣品 ，從而使互換性檢測特定物質影響下的破骨細胞活性成為可能 。材料的處置與常見細胞培養物的處置相同 。

【參考文獻】

1.       HENRIKSEN ET AL. AM J PATHOL 164:1537-1545 (2004).

2.       HOLLBERG ET AL. EXP CELL RES 279:227-238 (2002).

3.       IVASKA ET AL. J BIOL CHEM 30;279(18):18361-9 (2004).

4.       KARSDAL ET AL. AM J PATHOL 166:467-476 (2005).

5.       SCHALLER ET AL. J BONE MINER RES 19:1144-1153 (2004)

6.       STROUP ET AL. J BONE MINER RES 16:1739-1746 (2001).